در حال حاضر گروهي از وكتورهاي ويروسي وجود دارند كه براي ساخت واكسن هاي نوين ويروسي مورد استفاده قرار مي گيرند. در ميان وكتورهاي ويروسي، وكتورهايي متعلق به ويروس هاي RNA دار با قطبيت منفي كاربرد گسترده تري در اين زمينه دارند. براي دستكاري ويروس ها با استفاده از تكنولوژي ژنتيك معكوس وجود وكتورهاي داراي توالي هاي پروموتري خاص و بيش از يك پايان دهنده ي رونوشت برداري (HDV ريبوزيم و T7 Terminator) از اهميت بالايي برخوردار است. به همين دليل نياز به طراحي و ساخت سيستم هايي كه بتوانند از روي ژن هاي ويروسي كلون شده در وكتورهاي نوتركيب ضروري به نظر مي رسد. هدف از اين نوآوري طراحي و ساخت سيستمي است كه بتوان با استفاده از آن خاتمه رونوشت برداري ژن هاي ويروسي نوتركيب را با صحت بالا انجام داد. به همين منظور عناصر ژنتيكي ويژه از جمله T7 Terminator و HDV ريبوزيم به بنيان وكتور اضافه شد تا با وجود MCS با توالي هاي اختصاصي براي آنزيم هاي محدودالاثر امكان Sequential Cloning براي ژن هاي ويروسي با هدف به كارگيري اين سيستم در ساخت واكسن هاي نوتركيب فراهم گردد.

اين اختراع در رابطه با چگونگي ساخت DNA واكسن هاي بيان كننده فرم هاي تغييريافته آنتي ژن H5 از يك ويروس آنفلوانزاي فوق حاد پرندگان و روش استفاده از آن براي القا و ارتقاي پاسخ هاي ايمني همورال و سلولي بر عليه ويروس آنفلوانزاي فوق حاد پرندگان در مدل موشي BALB/c مي باشد. اختراع حاضر شامل ساخت دو پلاسميد DNA بيان كننده فرم داخل غشايي و فرم ترشحي H5 مي باشد. براي افزايش ايمني زايي، هر دو فرم آنتي ژن به صورت متصل به 4 كپي از پپتيد ادجوانتي P28 بيان مي شوند. توالي كد كننده H5 در اين DNA واكسن در مقايسه با سويه وحشي ويروس داراي سه نوع تغيير مي باشد. كدون هاي كد كننده ژن H5 به گونه اي تغيير داده شده اند كه بيشترين ميزان بيان و توليد آنتي ژن را در سلول هاي پستانداران داشته باشند. ناحيه شكست آنزيمي بين دو زير واحد HA1 و HA2 به جهت بي خطر نمودن واكسن حذف شده است. تغيير آخر مرتبط با حذف دومن داخل غشايي پروتئين وحشي و ايجاد فرم ترشحي H5 مي باشد. واكسن اختراع شده را مي توان در مقايسه با واكسن هاي كشته و زنده تخفيف حدت يافته با سرعت بالاتر و هزينه كمتر براي مقابله با سويه هاي نوظهور ويروس آنفلوانزا توليد كرد.

آئروليزين يك آنزيم بيولوژيك مي باشد كه توسط باكتري آئروموناس هيدروفيلا كه در در ارگانهاي مختلف داخلي ماهي ها حضور دارد توليد و ترشح مي شود.اين آنزيم به صورت تجاري توسط پروفسور پيتر هاوارد در كانادا استخراج و به قيمت بالايي عرضه مي شود. از اين آنزيم اغلب براي ايجاد منفذ در غشاء سلول و نفوذ پذير كردن آن مورد استفاده مي شود و در اكثر كارهاي تحقيقاتي كه بر روي تك ياخته هاي داخل سلولي انجام مي شود و قصد جداسازي اين ميكروارگانيسم ها از داخل سلول به صورت دست نخورده وسالم را دارند اين آنزيم مورد استفاده قرار ميگيرد. از طرفي از اين آنزيم كه توسط يك شركت كانادايي نيز توليد مي شود و با اتصال آن به يك رنگ فلورسنت پروتئين هاي متصل به مولكول GPI را شناسايي مي كنند.من نيز در كار پايان نامه ي خود جهت جداسازي شيزونت يك انگل در داخل سلول يوكاريوتي ( تيلريا آنولاتا) نياز به اين آنزيم داشتم ولي از آنجايي كه واردكردن آن به جهت نداشتن كدنامبر و ساير مشخصات براي شركت هاي وارد كننده مشكل بود و هم قيمت بسيار بالايي داشت تصميم گرفتم خودم اين آنزيم را استخراج و جداسازي كنم كه خوشبختانه موفق هم شدم ودر وهله ي اول در پايان نامه ي خود با موفقيت از آن استفاده كردم.

خلاصه رفع نقص شده باكتري اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك (ETEC) يكي از عوامل اوليه اسهال در گوساله¬هاي تازه متولد شده و در برخي از گونه¬ها به عنوان مثال گوسفند و خوك مي¬باشد. هدف از اين اختراع، توليد آنتي¬بادي اختصاصي Y ضد آنتي¬ژن¬ FanC مسبب اسهال ناشي از اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك و معرفي آن به عنوان مكمل آغوز در جيره گوساله¬ها در نخستين روزهاي پس از تولد مي¬باشد. در اين پژوهش، توالي آنتي¬ژن FanC(K99) از بانك جهاني ژن بدست آمد و يك جفت آغازگر اختصاصي به منظور تكثير اين توالي نوكلئوتيدي با استفاده از نرم¬افزار Primer primer 5 طراحي گرديد. ژنوم استخراج شده از اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك به عنوان الگو در واكنش ژنجيره¬اي پليمراز مورد استفاده قرار گرفت. در پلاسميدpTZ57R/T كلون و در pET32a(+) ساب كلون شد. ناقل بياني نوتركيب به ميزبان بيان اشرشياكلي BL21CodonPlus(DE3) منتقل گرديد و پس از تخليص پروتئين نوتركيب FanC، جهت توليد آنتي¬بادي اختصاصي Y ضد اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك به مرغ¬هاي تخم¬گذار تزريق شد. تخم مرغ‌ها به مدت 8 هفته جمع آوري شدند و تخليص IgY انجام شد. IgY توليد شده در زرده تخم مرغ آنها با استفاده از روش SDS-PAGE و دات¬بلات بررسي و تأئيد شد. توان آنتي¬بادي اختصاصي در شناسايي پروتئين نوتركيب توليد شده با روش الايزا مورد بررسي قرار گرفت. كلونيگ آنتي¬ژن FanC با روش¬هاي كلوني PCR، هضم¬آنزيمي و تعيين توالي تأييد شد. توالي آنتي¬ژن FanC(K99) اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك سويه ايراني در بانك جهاني ژن با شماره دسترسي KP054295 ثبت شد. غلظت پروتئين نوتركيب FanC، 3/1 ميلي¬گرم بر ميلي¬ليتر بود. نتايج صحت آنتي¬بادي اختصاصي Y ضد اشرشياكلي انتروتكسيژنيك توليد شده را تأييد كرد. اين پروتئين توليدي مي¬تواند به عنوان مكملي همراه با آغوز در پيشگيري از سندروم اسهال ناشي از اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك در نخستين روزهاي اوليه پس از تولد فارم¬هاي دامپروري كشور مورد استفاده قرار گيرد.

اين اختراع در رابطه با ساخت ادجوانت مولكوليXIAP و كاربرد آن در افزايش بيان آنتي ژن و ارتقاي پاسخ هاي ايمني ذاتي و اكتسابي مي باشد. در اين اختراع، كاربرد ادجوانت مولكولي XIAP به دليل دارا بودن ويژگي هايي از قبيل قابليت جلوگيري از آپوپتوز، القاي توليد سايتوكاين هاي التهابي و مولكول هاي كمك تحريكي و القاي تبديل سلول هاي عضلاني بيان كننده آنتي ژن به سلول هاي عرضه كننده آنتي ژن مورد توجه و استفاده قرار گرفته است. در اين اختراع، چگونگي عملكرد اين ادجوانت به همراه واكسن نوتركيب آنفلوانزاي فوق حاد پرندگان به روش تزريق داخل عضلاني در مدل موشي BALB/c نشان داده شده است. با استفاده از ادجوانت مولكولي XIAP مي توان طول عمر سلول هاي ترانسفكت شده با واكسن نوتركيب بيان كننده هماگلوتينين را در شرايط كشت سلولي يوكاريتي افزايش داد كه اين افزايش طول عمر با افزايش مدت زمان بيان آنتي ژن و القاي قويتر پاسخ هاي ايمني در in vivo همراه است. همچنين در اينجا نشان داده شده است كه با تجويز همزمان ادجوانت مولكولي XIAP به همراه واكسن نوتركيب بيان كننده فرم ترشحي هماگلوتينين 5 آنفلوانزاي فوق حاد پرندگان تحت تيپ H5N1 مي توان پاسخ هاي ايمني همورال را در مقايسه با استفاده از واكسن بيان كننده هماگلوتينين 5 فاقد ادجوانت به ميزان قابل توجهي در مدل موشي BALB/c افزايش داد. ادجوانت مولكولي XIAP در مقايسه با ادجوانت هاي كانونشنال داراي سميت و هزينه توليد كمتر، اختصاصيت بالاتر و سهولت در تجويز و استفاده مي باشد.